這次講解堿裂解法，從大腸桿菌中抽提質(zhì)粒的基本原理。

我們將搖菌得到的混合物離心，去除培養(yǎng)基，就可以獲得大腸桿菌，加入溶液1重懸。溶液1含緩沖成分，和抑制Dnase的EDTA。加入溶液2，含NaOH和SDS。在強(qiáng)堿環(huán)境下，細(xì)菌的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜被破壞，釋放出基因組DNA和質(zhì)粒DNA。此時(shí)基因組DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)被破壞，發(fā)生變性。質(zhì)粒DNA也會(huì)發(fā)生變性，但兩條互補(bǔ)鏈仍會(huì)互相盤(pán)繞，并緊密的結(jié)合在一起。

當(dāng)加入溶液3（含醋酸鉀溶液）使pH恢復(fù)中性時(shí)，共價(jià)閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA復(fù)性快，而線性的染色體DNA復(fù)性緩慢，細(xì)菌蛋白質(zhì)、破裂的細(xì)胞壁和變性的染色體DNA會(huì)相互纏繞成大型復(fù)合物，被十二烷基硫酸鹽包蓋，從溶液中有效地沉淀下來(lái)。經(jīng)過(guò)離心除去變性劑后，就可以從上清中回收復(fù)性的質(zhì)粒DNA。

質(zhì)粒抽提試劑盒中，通常還有 DNA吸附柱，將質(zhì)粒DNA吸附，其他的雜質(zhì)被洗去。最后用洗脫液，將質(zhì)粒DNA洗脫下來(lái)。

以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

安培生物科技有限公司介紹：

安培生物堅(jiān)持為生命科學(xué)研究、活體動(dòng)物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶(hù)，提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無(wú)動(dòng)物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺(tái)基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專(zhuān)注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)