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Brachet反應顯示細胞中DNA和RNA
發(fā)布時間： 2023-01-13 點擊次數： 1899次簡介
Brachet 反應顯示細胞中 DNA 和 RNA 是利用了 DNA 和 RNA 這種結構上的差異，采用不同的染料同時顯示兩者在細胞中的分布情況。原理
Brachet 反應顯示細胞中 DNA 和 RNA 的基本原理是利用了 DNA 和 RNA 這種結構上的差異，采用不同的染料同時顯示兩者在細胞中的分布情況。甲基綠、派洛寧（methyl green，pyronin）為帶有正電荷的堿性染料（結構式見圖3-2），可與帶有負電荷的核酸分子結合，兩種染料的作用具有選擇性，甲基綠帶有2 個 正電荷，易與雙鏈的 DNA 分子結合，使其顯示藍綠色；派洛寧帶有1 個 正電荷，易與單鏈的 RNA 分子結合，使其顯示紅色。也有人認為其染色原理與 DNA 和 RNA 分子的不同聚合程度有關。細胞經甲基綠-派洛寧混合液處理后，其 DNA 和 RNA 出現不同的顯色反應，以此可對細胞中的DNA、RNA進行定位、定性和定量分析。
材料與儀器
器材：
尖頭鑷子、染色缸、蓋片、載玻片、吸管、吸水濾紙、普通光學顯微鏡、CO2 培養(yǎng)箱、 HeLa 人宮頸癌上皮細胞。
試劑：①0.01 mol ／L PBS（pH 7.2）（36 mL 0.2 mol ／ L 磷酸氫二鈉液14 mL 0.2 mol ／L 磷酸二氫鈉液加雙蒸水至1000 mL ?；靹颍?全溶解分裝，經高壓滅菌后保存于4 ℃ 冰箱備用。）②Carnoy 固定液（甲醇:冰醋酸＝3:1）③甲基綠-派洛寧混合液④蒸餾水⑤丙酮⑥二甲苯⑦中性樹膠步驟
Brachet 反應顯示細胞中 DNA 和 RNA 的基本過程可分為如下幾步：A.將培養(yǎng)的 HeLa 細胞接種于蓋片，24～48 h 后生長為單層。B.取細胞蓋片1 張 ，用 PBS（pH7.2）漂洗3 次 ，吸水濾紙吸去液體。C.放入 Carnoy 固定液中固定30 min 。D.向蓋片滴加甲基綠-派洛寧混合液，染色30 min 。E.蒸餾水輕輕漂洗2～3 次 （每次2～3 s ），濾紙吸去多余水分。F.蓋片浸入丙酮中分色2～3 s 。G.浸入丙酮-二甲苯（1:1）中5 s 。H.浸入純二甲苯中透明5 min 。I.滴1 滴 中性樹膠于載玻片上，將蓋片細胞面朝下封片。J.鏡下觀察。以上就是本期的內容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網站鏈接了解更多技術與產品資訊。
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