原理

材料與儀器

步驟

1、取材 根據實驗目的和條件選取不同的材料

2、分離原生質體

（1） 撕葉下表皮

（2）酶解 將撕去下表皮的葉片剪成小塊，放在盛有5mL 酶液的小培養(yǎng)皿中，讓去除下表皮的一面接觸酶液，輔滿一層，在25——28℃下酶解60——90 分鐘

3、收集純化

（1）用吸管將酶解液吸至5mL 離心管中，以600rpm 離心5 分鐘以上，使原生質體沉降

（2）將上清（酶解液）回收，剩下原生質體及殘渣于管底

（3）加氯化鈣液約2mL，輕輕吹打均勻

（4）用注射器向離心管底部緩緩注入蔗糖約2—3mL，出現(xiàn)下部蔗糖液，上部原生質體懸浮液

（5）以600rpm 離心10 分鐘，在兩液相之間出現(xiàn)一條綠色帶，便是純凈的原生質體

4、觀察或培養(yǎng)

取少許原生質體于載片上，蓋片觀察其形態(tài)，或者將原生質體接種在培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，再生植株。

注意事項

常見問題