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    使用zeta life轉(zhuǎn)染試劑過程應(yīng)注意以下幾點(diǎn)

    發(fā)布時(shí)間: 2022-12-09  點(diǎn)擊次數(shù): 1451次
       zeta life轉(zhuǎn)染試劑用于將DNA和siRNA轉(zhuǎn)染到真核細(xì)胞系和各種原代細(xì)胞中,可轉(zhuǎn)染極度難轉(zhuǎn)染的免疫細(xì)胞、懸浮細(xì)胞,如:T細(xì)胞、NK細(xì)胞、人淋巴細(xì)胞、THP-1等,可高效率轉(zhuǎn)染siRNA到任何哺乳動(dòng)物細(xì)胞。
      使用zeta life轉(zhuǎn)染試劑過程要注意以下幾點(diǎn):
      1.細(xì)胞密度:轉(zhuǎn)染質(zhì)粒時(shí),細(xì)胞密度為80-100%,轉(zhuǎn)染RNA(siRNA或miRNA)時(shí),細(xì)胞密度為60-80%,具體細(xì)胞密度必須結(jié)合考慮核酸種類、轉(zhuǎn)染試劑種類和細(xì)胞生長(zhǎng)密度極限。
      2.RNA用量:10-30 pmol/孔(以24孔板為例),具體用量根據(jù)轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)實(shí)驗(yàn)確定。
      3.試劑用量:轉(zhuǎn)染試劑說明書推薦了一個(gè)使用范圍,具體用量根據(jù)轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)實(shí)驗(yàn)確定。
      4.根據(jù)轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)實(shí)驗(yàn)確定核酸的用量及轉(zhuǎn)染試劑的用量(核酸與轉(zhuǎn)染試劑的比例關(guān)系),轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)實(shí)驗(yàn)一般在24孔板中進(jìn)行,其他格式的培養(yǎng)器皿請(qǐng)根據(jù)底面積的比例進(jìn)行計(jì)算。
      5.轉(zhuǎn)染試劑使用前才從4℃中取出,取用前,先短暫離心,然后放在渦旋振蕩器上點(diǎn)動(dòng)混勻三次,每次持續(xù)1秒,混勻后短暫離心,上述措施是為了混勻轉(zhuǎn)染試劑,保證使用效果,使用后立即放回4℃保存。
      6.核酸和轉(zhuǎn)染試劑分別用Opti-MEM稀釋,稀釋的核酸可以通過彈勻,吹打均勻,顛倒混勻或渦旋點(diǎn)動(dòng)混勻,稀釋的轉(zhuǎn)染試劑可以通過彈勻,顛倒混勻或渦旋點(diǎn)動(dòng)混勻,不可使用吹打均勻;混勻后均需短暫離心。
      7.把稀釋的核酸和稀釋的轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合混勻時(shí),應(yīng)該把稀釋的核酸加入稀釋的轉(zhuǎn)染試劑中(順序不可調(diào)轉(zhuǎn));加入后立即進(jìn)行(不要耽擱)彈勻或顛倒混勻,先不進(jìn)行短暫離心,待所有的管子復(fù)合完畢后,在一起進(jìn)行渦旋點(diǎn)動(dòng)混勻三次,每次持續(xù)1秒,然后短暫離心。
      8.轉(zhuǎn)染復(fù)合物孵育形成時(shí)盡量避光室溫或37℃放置。
      9.進(jìn)行RNA轉(zhuǎn)染時(shí),盡量使用無酶及滅菌處理的耗材。
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